流式細胞儀在免疫表型分析、細胞周期檢測、稀有細胞鑒定等領域應用廣泛，但其結果的準確性高度依賴校準狀態(tài)。一次規(guī)范的流式細胞儀校準，不僅能消除儀器漂移，還能保證不同批次、不同操作人員之間的數(shù)據(jù)可比。本文以常見的多色檢測為例，介紹從開機自檢到補償調整的完整實操流程，新手也能按步驟完成。
一、開機與自檢?
開機后先運行儀器自帶的自檢程序，檢查激光功率、液流系統(tǒng)、光電倍增管(PMT)響應及管路密封性。多數(shù)儀器會在自檢報告中給出各通道的信號強度與背景噪聲值，需確認它們在廠商規(guī)定的正常范圍。若近期有移動或維修，建議先做液流速率校準，確保細胞通過檢測區(qū)的速度與標稱值一致。
二、熒光通道靈敏度校準?
使用廠家配套的單色校準微球(如Spherotech Rainbow Calibration Beads)，分別在各熒光通道采集信號，調整PMT電壓，使同一微球在不同通道的中位熒光強度(MFI)落在推薦范圍，并保證背景噪聲較低。此步驟可消除通道間的靈敏度差異，為后續(xù)多色分析打好基礎。
三、通道間補償校準?
多色檢測時，不同熒光染料的發(fā)射光譜會互相重疊，必須通過補償消除串色。常用方法是使用單染對照樣本(只標記一種熒光染料)，在相應通道采集數(shù)據(jù)并生成補償矩陣。操作時需注意：
單染樣本濃度與染色條件應與實驗樣本一致；
采集足夠的事件數(shù)(一般≥5000)，保證統(tǒng)計可靠；
在軟件中輸入補償值或通過向導自動計算，保存并驗證矩陣有效性。
四、標準微球定量校準(可選)?
若需絕對計數(shù)，可使用已知濃度的校準微球，在設門分析后反推細胞濃度，并據(jù)此調整流速或軟件換算系數(shù)，確保定量結果準確。
五、記錄與復校?
將校準日期、環(huán)境條件、微球批號、PMT電壓、補償矩陣等參數(shù)完整記錄。建議每1–3個月或在更換激光器濾片、維修液路后重新校準，遇到數(shù)據(jù)異常(如分群偏移、背景升高)應及時排查并復校。
從開機自檢到補償調整，流式細胞儀校準并不復雜，關鍵在于按規(guī)程操作并堅持記錄。規(guī)范的校準能讓儀器始終保持較佳狀態(tài)，為免疫學研究與臨床診斷提供穩(wěn)定、可靠的數(shù)據(jù)支撐。
更新時間：2025-12-22
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